Arbejdsprincippet for en pipette baseres hovedsagelig på pistolk motionen og oprettelsen af vakuum eller tryk. Pipetter kan opdeles i to kategorier: gaspistolsystemer og eksterne pistolsystemer. Her følger en detaljeret introduktion:
1. Gaspistonsystem. Denne type system indeholder luft inde i sig, og når kontrolknappen trykkes ned, vil pistonen skubbe en del af luften ud af pipetten, hvilket skaber en vakuum i sughovedet for at trække væskerne ind. Når knappen løslades, fylles vakuumdelen op med væske, som suges ind i sughovedet og derefter udskydes ved at trykke pistonen nedad. Eksternt pistonsystem. Pistonen i dette system kommer direkte i kontakt med målevæsken. Når pistonen trækkes op, trykker atmosfæriske tryk væskerne ind i sughovedet.
Desuden kan kapaciteten af pipetten indstilles ved at justere pipettens volumenkontrolknap. En pipettes nøjagtighed afhænger også af dens design, såsom elasticiteten af fjederen, hvilket afgør pipettens sug- og udsugsevne.